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草魚呼腸孤病毒毒通用PCR檢測試劑盒

草魚呼腸孤病毒毒通用PCR檢測試劑盒

產品時間:2019-07-25

簡要描述:

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產品介紹:

產品名稱:草魚呼腸孤病毒毒通用PCR檢測試劑盒

英文名稱:Grass Carp Reovirus(GCRV)RTPCR

 

 

準備物品:

清理液(A)                                   毫升

染色液(t B)                                 微升

稀釋液(C)                                   毫升

溶解液(tD)                                  毫升

產品說明書                                    1份

 

注意事項:

1.基礎程序。

2.擴增溫度和延伸溫度。

3.反應時間。

4.循環次數。

5.PCR 反應液的配制。

6.PCR技術的基本原理。

7.PCR的反應動力學。

8.PCR擴增產物。

9.PCR反應體系與反應條件。

 

反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,草魚呼腸孤病毒毒通用PCR檢測試劑盒PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

 

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