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ELISA試劑盒靈敏度低原因解析
發布時間:2019-07-01   點擊次數:57次

上月中旬,貴州大學王老師在我司訂購了小鼠免疫球M(IgM)elisa試劑盒。實驗結束后,反映陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術分析如下:

1. 試劑盒必須在有效期內使用, 超過有效期的產品可能會產生很弱的信號;

2. 試劑盒沒有按規定進行保存,受高溫影響;

3. 試劑、樣品用前未平衡至室溫;

4. 加入試劑的體積和時間有誤, 移液器計量不準,吸嘴內水分太多或不清潔;

5. 洗板及加樣過程中,酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力;

6. 孵育時間及孵育溫度未達到要求 ,反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整;

7. 洗板次數過多,或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長;

8. 顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入;

9. 底物作用時間不夠;

10. 蒸餾水水質有問題;

 

實驗前檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過期。不要將試劑盒長時間置于常溫下,按使用規定儲藏。

確定所使用的試劑體積正確,加入時間適當。校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應完全。

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈,確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

孵育溫度應控制在37-38℃,孵育時間嚴格按照說明書操作。保溫期內不宜多開門,以免影響保溫。

嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數。

顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入準確定時間。

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